Optische Analyse dynamischer Intra- und Inter-Aktionen von signalübertragenden Proteinen in lebenden immunkompetenten Zellen

• Antragsteller: Dr. Roland Hartig
• Fachliche Zuordnung: Immunologie
• Förderung: Förderung von 2003 bis 2011
• Projektkennung: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Projektnummer 5470521

• Erstellungsjahr: 2014

Zusammenfassung der Projektergebnisse

In Teilprojekt 8 wurde mit Hilfe eines minimal-invasiven Multiparameter Fluoreszenzlebensdauer Mikroskops für TSCSPC (Time and Space Correlated Single Photon Counting) die Stimulus-induzierte Konformationsänderung der Tyrosinkinase p56lck visualisiert. Hierzu wurde ein FRET-basierter Lck-Biosensor in Lck-defizienten Jurkat T-Zellen und primären humanen T-Zellen exprimiert. Die Stimulation erfolgte mittels löslicher Antikörper und Antigen-präsentierender Zellen. Stimulus-vermittelte Konformationsänderungen von Lck konnten so über die Änderung der FRET-Signale analysiert und orts- und zeitaufgelöst visualisiert werden.

Projektbezogene Publikationen (Auswahl)

• (2006) FRET-FLIM at nanometer spectral resolution from living cells, Optics Express 14: 12217-12229
  Nair DK, Jose M, Kuner T, Zuschratter W, Hartig R
  
• . Prokazov Y, Turbin E, Herzog A, Michaelis B, Zuschratter W, Kemnitz K (2009) Reborn quadrant anode image sensor, Nuclear Instrumentation and Methods 604: 221-223
  Prokazov Y, Turbin E, Herzog A, Michaelis B, Zuschratter W, Kemnitz K
  
• (2011) Wide-Field Multi-Parameter FLIM: long-term minimal invasive observation of proteins in living cells. PLoS One 6: e15820
  Vitali M, Picazo F, Prokazov Y, Duci A, Turbin E, Götze C, Llopis J, Hartig R, Visser AJ, Zuschratter W
  
• (2012) Desynchronisation of glycolytic oscillations in yeast cell populations. PLoS One 7: e43276
  Weber, A, Prokazov, Y, Zuschratter, W, Hauser, MJ
  
• (2013) T cell activation results in conformational changes in the Src family kinase Lck to induce its activation. Sci Signal 6(263): ra13
  Stirnweiss A, Hartig R, Gieseler S, Lindquist JA, Reichardt P, Philipsen L, Simeoni L, Poltorak M, Merten C, Zuschratter W, Prokazov Y, Paster W, Stockinger H, Harder T, Gunzer M, Schraven B
  
• (2014) Wide-field fluorescence lifetime imaging with multi-anode detectors. Methods Mol Biol 1076: 457-480
  Hartig R, Prokazov Y, Turbin E, Zuschratter W