Konfokales Laserscanning-Mikroskop
Final Report Abstract
Das Konfokalmikroskop in der bewilligten Ausstattung wurde in mehreren Projekten eingesetzt: Zum einen wurden Proteine der Suppressor of Cytokine Signaling (SOCS) Familie bezüglich ihrer subzellulären Lokalisation untersucht. Dazu wurden fluoreszierende Fusionskonstrukte mittels Lebendzellmikroskopie untersucht. Subzelluläre Verteilungvorgänge wurden außerdem mittels UV-aktivierbarer/konvertierbarer Farbstoffe sowie quantitativ mittels FLIP und FRAP Experimenten analysiert. Außerdem die Funktion von SOCS-Proteinen für die Immunevasion von Toxoplasma gondii Parasiten getestet. Dazu waren die Aufstellung des Mikroskops im S2-Sicherheitsbereich und Möglichkeit zur Lebendzellmikroskopie essentiell. Des Weiteren wurde die Kolokalisation verschiedener SOCS Proteine mit der Serin/Threoninkinase Pim-1 untersucht. In einem weiteren Projekt wurde Integrität von siRNA während der Aufnahme in Zellen mittels FRET Analysen in Kooperation mit Prof. Mark Helm, Mainz studiert. Weiterhin wurde die Rolle von Bleb-artigen Zellfortsätzen in der Motilität von Tumorzellen analysiert, die zur Identifizierung einer für diese Zellfortsätze spezifischen Aktin Polymerisierungsmaschinerie führten. Ebenso wurde mit Hilfe des Gerätes der Einfluss des von HIV-1 kodierten Nef Proteins auf die Motilität von CD4+ T Lymphozyten studiert. Diese Untersuchungen konnten Nef als Inhibitor von Zellmotilität identfizieren und einen zugrunde liegenden molekularen Mechanismus aufklären. Weiterhin wurde das Gerät für Untersuchungen zum Mechanismus eingesetzt über den das HIV-1 Protein Vpu den zellulären Restriktionsfaktor CD317/Tetherin antagonisiert. Die Ergebnisse dieser Analysen zeigen, dass Vpu spezifisch den anterograden Transport neu synthetisierter CD317 Moleküle inhibiert, um den Restriktionsfaktor zu inaktivieren. Die zelluläre Lokalisation von RAG, Ku70 und ZAP70 wurde in B Zellen nach Stimulation mit TLR9 Liganden untersucht. Ebenfalls konnte die Translokation von SOCS und PIM-1 in Zellen, die mit dem bakteriellen Toxin PMT stimuliert waren, bestimmt werden. Schließlich wurden umfangreiche Untersuchungen zur zellulären Aufnahme und Verteilung von DNA-RNA-Hybrid-Molekülen vorgenommen. Diese Konstrukte sind geeignet, antagomir und siRNA Moleküle effizient in Zellen zu einzubringen. Außerdem wurde das beantragte Mikroskop eingesetzt, um Interaktionpartner einer calcium-abhängigen Proteinkinase des Malariaerregers zu ermitteln. Dies ist in der parasitären Vakuole des Parasiten und damit sozusagen in einem extraparasitären Kompartment des Parasiten lokalisiert. Mittels FRET Analysen wurden Interaktionspartner dieser Kinase charakterisiert.
Publications
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