Aufbau freitragender Lipiddoppelschichten mit Diffusionsunterdrückung für die konfokale Einzelmolekül-FLIM-FRET Analyse von schaltbaren Membranrezeptoren und Transportern (A01)

• Fachliche Zuordnung: Strukturbiologie ; Anatomie und Physiologie ; Biophysik
• Förderung: Förderung von 2015 bis 2019
• Projektkennung: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Projektnummer 258780946

Der G-Protein gekoppelte Membranrezeptor Neurotensin-1 (NTSR-1) wird in Bakterien exprimiert, aufgereinigt und mit zwei Fluoreszenzfarbstoffen für Einzelmolekül-Förster-Resonanz-Energietransfer (smFRET) Messungen markiert. Rekonstitutierte NTSR-1 oder HCN2-Ionenkanäle werden mit einer planaren Lipidmembrane (BLM) fusioniert. Dynamische Konformationsänderungen werden in Mikrofluidik-Strukturen mit einstellbaren Potentialen konfokal-zeitaufgelöst oder mittels Weitfeld-smFRET-Mikroskopie untersucht. Diffusion von Membranproteinen in der BLM wird durch ein Annexin-V Netzwerk unterdrückt.

• DFG-Verfahren: Transregios
• Teilprojekt zu: TRR 166: Hochleistungs-Lichtmikroskopie zur Aufklärung der Funktion von Membranrezeptoren – ReceptorLight
• Großgeräte: Bilayer Explorer System
• Gerätegruppe: 3500 Zellzähl- und Klassiergeräte (außer Blutanalyse), Koloniezähler
• Antragstellende Institution: Friedrich-Schiller-Universität Jena
• Teilprojektleiter: Professor Dr. Michael Börsch