Zell-Sorter
Zusammenfassung der Projektergebnisse
Der Zell-Sorter wurde und wird am Lehrstuhl für Mikrobiologie zur Beantwortung einer Vielzahl infektionsund zellbiologischer Fragestellungen benutzt. Instrumental war dabei die Aufstellung des Geräts in einem für Arbeiten mit pathogenen Organismen zugelassenen Bereich, sowie die konsequente Anwendung arbeitschutztechnischer Vorkehrungen, die ein kontaminations- und expositionsfreies Arbeiten mit dem Zell- Sorter ermöglichten. Zu den Arbeiten zählten unter anderem das Screening von shRNA-basierten lentiviralen Bibliotheken, welche ungefähr 60.000 menschliche Gene durch RNAi auf mRNA- und damit auch auf Proteinebene depletieren können. Diese Hochdurchsatzscreens wurden bisher zur Identifizierung von Internalisierungsmechanismen von mehreren Bakterienarten durch Epithelzellen sowie zur Identifizierung von Wirtszellsignalwegen bei der Initialisierung des Zelltods durch intrazelluläre Pathogene eingesetzt. Weiterhin erlaubte das performante Gerät das Sortieren von Wirtszellen, welche mit hochkomplexen Pools bakterieller Transposonmutanten infiziert wurden, was letztlich zur Identifizierung eines neuen Virulenzregulators führte. Zudem konnten Messung des phagosomalen Ausbruchs von Staphylococcus aureus durch reversible Fluoreszenzlöschung von Fluorescein in den angesäuerten Phagosomen in Epithel, Endothelzellen sowie Macrophagen etabliert werden. Dies führte zur Identifikation der dabei beteiligten Virulenzfaktoren. Das Gerät erwies sich zudem als instrumental zur Erstellung von Einzelzellklonen bei shRNA-basierten Knockdowns und CRISPR/CAS-basierten Knockouts von Genen in Säugerzellen, welche nun erlauben, funktionelle Studien über die Beteiligung von Wirtszellfaktoren anzufertigen bei i) der Etablierung von intrazellulären Infektionen, ii) der Manipulation des Wirtszelltods durch internalisierte Pathogene, iii) bei dem phagosomalen Ausbruch von Pathogenen, etc. Darüber hinaus wurde der Zell-Sorter genutzt, um primäre adulte Stammzellen (von Maus und Mensch) zu isolieren und funktionell zu analysieren. Um das methodische Spektrum des Geräts zu erweitern, rüstete der Lehrstuhl für Mikrobiologie kürzlich den Zell-Sorter mit einem weiteren Laser nach, um durch die neue Konfiguration das Analysespektrum auf Untersuchungen zur Manipulation des Zellzyklus durch pathogene Organismen zu erweitern und um ratiometrische Messungen zu erlauben.
Projektbezogene Publikationen (Auswahl)
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(2013) Pilus phase variation switches gonococcal adherence to invasion by caveolin-1-dependent host cell signaling. PLoS Pathog. 9(5):e1003373
Faulstich M, Böttcher JP, Meyer TF, Fraunholz M, Rudel T
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(2013) Tyr728 in the Kinase Domain of the Murine Kinase Suppressor of RAS 1 regulates Binding and Activation of the Mitogen-activated Protein Kinase Kinase. J Biol Chem. 288(49):35237-52
Sibilski C, Mueller T, Kollipara L, Zahedi RP, Rapp UR, Rudel T, Baljuls A
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(2013). Cytoplasmic replication of Staphylococcus aureus upon phagosomal escape triggered by phenol-soluble modulin α. Cell Microbiol. 16(4):451-65
Grosz M, Kolter J, Paprotka K, Winkler AC, Schäfer D, Chatterjee SS, Geiger T, Wolz C, Ohlsen K, Otto M, Rudel T, Sinha B, Fraunholz M
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(2014) Tumor Suppressor p53 Alters Host Cell Metabolism to Limit Chlamydia trachomatis Infection. Cell Rep. 9(3):918-29
Siegl C, Prusty BK, Karunakaran K, Wischhusen J, Rudel T
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(2015) A MYC-driven change in mitochondrial dynamics limits YAP/TAZ function in mammary epithelial cells and breast cancer. Cancer Cell. 28(6):743-57
von Eyss B, Jaenicke LA, Kortlever R, Wiese KE, Letschert S, Royla N, Sauer M, Rosenwald A, Evan G, Kempa S, Eilers M
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(2015) EphrinA2 Receptor (EphA2) Is an Invasion and Intracellular Signaling Receptor for Chlamydia trachomatis. PLoS Pathog. 11(4):e1004846
Subbarayal P, Karunakaran K, Winkler AC, Rother M, Gonzalez E, Meyer TF, Rudel T
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(2015) Ubiquitin-dependent turnover of MYC antagonizes MYC/PAF1 complex accumulation to drive transcriptional elongation. Mol Cell. pii: S1097-2765(15)00867-9
Jaenicke LA, von Eyss B, Carstensen AC, Wolf E, Xu W, Geyer M, Eilers M, Popov N
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(2015); Chlamydia-infected cells shed Gp96 to prevent chlamydial re-infection Mol Microbiol. 98(4):694-711
Karunakaran K, Subbarayal P, Vollmuth N, Rudel T
