Interaction of ECF and ABC transporter modules studied by time resolved fluorescence microscopy and spectroscopy

• Antragsteller: Professor Dr. Andreas Herrmann
• Fachliche Zuordnung: Biophysik
• Förderung: Förderung von 2009 bis 2014
• Projektkennung: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Projektnummer 137912872

Die Organisation und Struktur von ECF- Transportern ("energy-coupling factor") (BioMNY, EcfAA`T) und vom Histidin-ABC Transporter (HisJ/LAO-HisQMP2) während ihres katalytischen Zyklus werden mittels zeitaufgelöster Fluoreszenzmikroskopie und –spektroskopie untersucht. Verschiedene Techniken einschließlich ‚Fluorescence Lifetime Imaging’, ‚Förster-Resonance- Energy-Transfer’, ‚Fluorescence (Cross) Correlation spectroscopy’ and ‚Fluorescence Recovery after Photobleaching’ werden genutzt, um die Wechselwirkung der Transporteruntereinheiten bzw. –module und deren konformationelle Dynamik zu studieren. Die Untereinheiten werden entweder durch fluoreszierende Proteine oder reaktive Fluorophore markiert. Die Markierung mit fluoreszierenden Proteinen ermöglicht Untersuchungen zur Wechselwirkung der Untereinheiten an lebenden Zellen (E. coli) sowie in Detergenz gelöster oder in Liposomen (‚Giant Unilamellar Vesicles’) bzw. in NanoDiscs rekonstitutierter Transportermodule. NanoDiscs werden genutzt zur Charakterisierung der Transporter auf dem Einzelmolekülniveau mittels Fluoreszenzbleichung. Die durch T. Eitinger und E. Schneider zur Verfügung gestellten biochemischen Methoden ermöglichen es, die Funktion der markierten Transporter bzw. ihrer Untereinheiten zu überprüfen. Unsere Untersuchungen komplementieren die Studien, die mittels Elektronenspinresonanz durchgeführt werden (siehe Anträge von T. Eitinger, E. Schneider und H.J. Steinhoff).

• DFG-Verfahren: Sachbeihilfen