Genetic and biochemical characterization of SRS2 and the RecQ helicases of plants

• Applicant: Professor Dr. Holger Puchta
• Subject Area: Plant Genetics and Genomics
• Term: from 2005 to 2012
• Project identifier: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 5450276

Wir konnten bereits Homologe von RecQ DNA Helikasen in Arabidopsis thaliana identifizieren und die exonukleolytische Aktivität des RecQ-verwandten Proteins AtWRNexo biochemisch charakterisieren. Nun soll die biochemische Charakterisierung der RecQ Helikasen sowie der vermutlich antagonistischen Srs2 Helikase vorangetrieben werden. Dabei sollen die Proteine im heterologen Systemen exprimiert werden. Die Untersuchungen sollen die Substratspezifität bei der Entwindung ebenso klären, wie die Frage in welcher mono- oder oligomeren Form die Helikasen aktiv sind. Nachdem wir eine größere Anzahl von Insertionsmutanten von Arabidopsis isoliert und bereits erste Hinweise auf genomische Instabilitäten im mutanten Hintergrund erhalten haben, sollen parallel die Funktion der Helikasen in vivo geklärt werden. Dabei wird mit Hilfe von transgenen Testerlinien die Beteiligung der einzelner Helikasen an verschiedenen Rekombinationswegen (intrachromosomale, interchromosomale, homeologe sowie meiotische Rekombination) geprüft. Schließlich soll versucht werden mittels biochemischer und genetischer Ansätze Interaktionsnetzwerke zwischen den Helikasen und anderen in DNA Rekombinationsprozesse involvierten Proteinen zu definieren, um die Rolle der einzelnen Helikasen umfassend zu charakterisieren.

• DFG Programme: Research Grants
• Participating Person: Dr. Manfred Focke