Funktionelles Mapping und Untersuchung der Immunogenität tumor-selektiver Genprodukte
Final Report Abstract
Eine der zentralen Zielsetzungen der Tumorimmunologie ist es, tumorzell-selektive Genprodukte für spezifische Vakzin-Ansätze molekular zu definieren und dergestalt zu validieren, dass diejenigen ausgewählt werden können, die am wahrscheinlichsten geeignet sind für die Entwicklung von Krebsimpfstoffen. Im Rahmen des geförderten Projektes haben wir in silico Ansätze entwickelt, die die Identifizierung von Gewebsdifferenzierungsantigenen mit erhaltener Expression in entarteten Zellen ermöglichen. Wir konnten die Funktion von zwei dieser kaum charakterisierten Moleküle (PLAC1, MS4A12) erarbeiten und für beide durch siRNAUntersuchungen eine Beteiligung an tumor-promotierenden Zellprozessen nachweisen. Im Falle von MS4A12 haben wir dabei aufdecken können, dass es um einen neue Komponente eines store operated calcium channel (SOC) handelt, der die Sensitivität von Krebszellen hinsichtlich EGF (epidermal growth factor) Signaling erhöht. Für PLAC1 haben wir gezeigt, des es insbesondere an Brustkrebszellen zur AJCT Kinase Hyperphosphorylierung beiträgt. Darüber hinaus haben wir Plattformtechnologien entwickelt. Eine erlaubt eine funktioneile Kartierung von neuen Genprodukten, für die es keinerlei Anhaltspunkte hinsichtlich der biologischen Funktion gibt. Hierbei wird das Genprodukt über in vitro transkribierte RNA in Zellen eingebracht und die konsekutiven Veränderungen werden mittels genomweiter Transkriptionsanalyse mittels High-Density Microarrays erfasst. Wir haben gezeigt, dass dadurch Signaltransduktionswege aufgedeckt werden können, in die das jeweilige Gen involviert ist und die tatsächlich auch in primären humanen Tumoren dysreguliert sind. Die zweite Technologieplattform dient derm Zweck schnell und robust für beliebige Genprodukte zu zeigen, ob sie effizient spezifische CD8 + und CD4+ TLymphozyten expandieren können. Auch für dieses System haben wir IVT RNA als Antigenformat genutzt und einen Cytokinsekretionsassay entwickelt, der direkt ex vivo eine polyepitope Messung ermöglicht. Wir gehen davon aus, dass unser Ansatz Grundlagen dafür vermittelt, Panels von Vakzinzieltstrukturen Side-by-side zu beurteilen.
Publications
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