Identifizierung und Charakterisierung der Arg-100-Transferrinrezeptor-Sheddingprotease

• Antragsteller: Professor Dr. Hendrik Fuchs
• Fachliche Zuordnung: Public Health, Gesundheitsbezogene Versorgungsforschung, Sozial- und Arbeitsmedizin
• Förderung: Förderung von 1999 bis 2003
• Projektkennung: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Projektnummer 5220036

Der Transferrinrezeptor (TfR) vermittelt über Bindung und Internalisierung des Eisentransportproteins Transferrin die Eisenaufnahme in die Zelle. Die extrazelluläre Domäne des humanen membranständigen TfR kann durch proteolytische Spaltung Cterminal von Arg-100 ins Serum freigesetzt werden, wo sie als 660 Aminosäuren großer Serum-TfR vorkommt. Es wird vermutet, daß der Sheddingprozeß eine wesentliche Rolle für die Regulation der Zahl der TfR-Moleküle an der Zelloberfläche spielt. Die das Shedding katalysierende Protease ist bisher jedoch nicht bekannt. Ziel ist es, die TfR-Shedding-Protease zu identifizieren, zu reinigen, zu klonieren und funktionell zu charakterisieren. Zunächst soll die Protease mit verschiedenen Methoden wie der Affinitätschromatographie über immobilisierte, reversibel bindende Inhibitoren gereinigt und N-terminal sequenziert werden. Durch die Immunisierung von Mäusen sollen monoklonale Antikörper gewonnen werden. Unter Verwendung degenerierter Primer soll die cDNA der Protease mittels RT-PCR, EST-Datenbankvergleich sowie 3'- und 5'-RACE identifiziert werden. Alternativ soll die cDNA durch DNA-Hybridisierung oder Expressionsklonierung aus cDNA-Banken isoliert werden. Die Funktionen der Protease, ihre Regulation und ihre Lokalisation sollen anschließend im Zellkulturmodell und an Gewebeschnitten umfassend analysiert werden.

• DFG-Verfahren: Sachbeihilfen