Struktur des Initiationsproteins DnaA und seine Interaktion mit DNA

• Antragsteller: Professor Dr. Walter Messer (†)
• Fachliche Zuordnung: Grundlagen der Biologie und Medizin
• Förderung: Förderung von 1999 bis 2002
• Projektkennung: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Projektnummer 5194653

DnaA Protein ist das zentrale Protein bei der Initiation der DNA Replikation bei Bakterien. Seine Interaktion mit DNA, besonders mit dem Replikations-Origin, oriC, soll aufgeklärt werden. Folgende Teilfragen werden bearbeitet: 1. Kristallisation des DnaA Proteins von Thermus thermophilus, in Zusammenarbeit mit Prof. Dr. Wolfram Saenger, FU Berlin. 2. Mutationsanalyse der C-terminalen DNA Bindedomäne. Messung der Kintetik der DNA-Bindung mutierter DnaAs mit Hilfe von Surface Plasmon Resonance (BlAcore). 3. DnaA Komplexe mit oriC. Protein Interaktionen und die Regeln der Bindung an DNA-Fragmente mit multiplen Bindungsstellen werden analysiert mit Hilfe von Gel-Retardierung, BIAcore, Elektronenmikroskopie und KMnO4-Footprinting. 4. Laden der replikativen Helikase. Die Biochemie des lokalen Entwindens im DnaA-oriC Komplex und die Rolle von DnaA beim Laden der DnaB Helikase sollen aufgeklärt werden.

• DFG-Verfahren: Sachbeihilfen