Studien zur Funktion des Cathepsin D von Schistosoma mansoni unter Verwendung transgener Würmer

• Applicant: Dr. Bernd Kalinna
• Subject Area: Microbiology, Virology and Immunology
• Term: from 1999 to 2002
• Project identifier: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 5173142

Im geplanten Projekt soll die Funktion des Cathepsin D von S. mansoni, eines wichtigen Verdauungsenzyms, untersucht werden, das vom Antragsteller bereits molekular charakterisiert wurde. Kernstück der Studien ist die Überexpression des Enzyms in den Würmern bzw. die Herstellung von knock-out-Mutanten. Dazu ist die Herstellung transgener Schistosomen notwendig, bei denen DNS zunächst mit Hilfe von Plasmiden transient transfiziert wird und später mit Hilfe von Transposons oder durch homologe Rekombination stabil in das Genom integriert wird. Die Etablierung dieser Technik bei Helminthen wäre ein bedeutender Schritt für das Verständnis der Biologie sowie für die Entwicklung von Anthelmintika oder Impfstoffen. Zur Etablierung dieser wichtigen Techniken soll S. mansoni zunächst mit dem Reportergen Green Fluorescent Protein (GFP) unter Einsatz eines mariner-Transposons stabil transfiziert werden. In einem zweiten Schritt wird der gezielte Einbau eines zusätzlichen Cathepsin D-Gens durch homologe Rekombination angestrebt. Langfristiges Ziel ist es, nach dem Einbau eines zusätzlichen Gens sowie dem Austausch des Originalgens durch ein mutiertes Gen, knock out-Linien herzustellen, bei denen die Expression des eingebauten Gens reguliert werden kann (konditionelle knock out-Linien).

• DFG Programme: Research Grants