Untersuchung von TAp63a mittels konformations-spezifischer DARPins

• Antragsteller: Professor Dr. Volker Dötsch
• Fachliche Zuordnung: Biochemie ; Strukturbiologie
• Förderung: Förderung von 2017 bis 2020
• Projektkennung: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Projektnummer 367436894

Designed Ankyrin Repeat Proteins (DARPins) sind modulare Proteine, bestehend aus 3-5 Modulen, die als spezifische Bindeproteine ähnlich wie Antikörper eingesetzt werden können. Durch Ribosom-Display Techniken können DARPins erzeugt werden, die spezifisch Proteine oder Konformationen erkennen. Das Protein p63 ist ein Mitglied der p53 Tumorsuppressorfamilie, ist allerdings selber kein klassischer Tumorsuppressor. P63 erfüllt wichtige entwicklungsbiologische Funktionen als Kontrollfaktor des proliferativen Potentials von Zellen in der Basalschicht von Epithelgeweben sowie als Qualitätskontrollfaktor in Eizellen. Eizellen exprimieren eine spezielle Isoform von p63, die eine nur dimere, inaktive und geschlossene Konformation annimmt, die durch Phosphorylierung in die offene, aktive und tetramere Konformation überführt werden kann. Wir haben DARPins erzeugt, die entweder die geschlossene dimere oder die offene tetramere Konformation selektiv erkennen. Zusätzlich haben wir DARPins gegen alle gefalteten Domänen aller Mitglieder der p53 Proteinfamilie erzeugt. Wir wollen jetzt die Selektivität dieser DARPins im zellulären Kontext validieren und sie benutzen, um in Mausgewebe nach den verschiedenen Konformationen von p63 zu suchen. Es wurde berichtet, dass die Isoform, die in Eizellen vorkommt, ebenfalls in bestimmten Stammzellen der Haut existiert und während der embryonalen Hautentwicklung von Bedeutung ist. Wir werden untersuchen, welche der verschiedenen Konformationen p63 in den verschiedenen Geweben und Entwicklungsstadien annimmt. Zusätzlich konnten wir zeigen, dass DARPins die mutierte SAM Domäne in vitro stabilisieren können. Mutationen in dieser Domäne verursachen im Menschen das Hay-Wells Syndrom, durch Aggregation der destabilisierten SAM Domäne. Wir wollen in Zellkultur testen, ob die DARPins die SAM Domäne stabilisieren und somit Aggregation verhindern können.

• DFG-Verfahren: Sachbeihilfen