SRP-dependent membrane targeting of translating ribosomes

• Applicant: Professor Dr. Wolfgang Wintermeyer
• Subject Area: Biochemistry
• Term: from 2007 to 2010
• Project identifier: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 34486546

Proteine der inneren Membran der Bakterienzelle werden cotranslational mit Hilfe der Signalerkennungspartikel (SRP) zum Translocon der Membran gefuhrt (targeting). SRP erkennt hydrophobe Signalsequenzen sobald sie als naszierende Kette am translatierenden Ribosom (RNC) exponiert werden. Anschließend bindet der RNC-gebundene SRP an den SRP-Rezeptor an der Membran, der RNC wird zum Translocon geführt und die naszierende Peptidkette in die Membran eingebaut. Ziel des Vorhabens ist es, diese Vorgänge mechanistisch zu untersuchen. Die Thermodynamik und Kinetik der Bildung des targeting complex, bestehend aus RNC, SRP, SRP-Rezeptor und Translocon, soll untersucht werden. Dabei werden Fluoreszenzmessungen (insbesondere auch Fluoreszenzenergie- Resonanztransfer (FRET)) angewendet. Parallel wird mittels quench-flow die Kinetik der GTP-Hydrolye durch SRP und SRP-Rezeptor untersucht, die beim Zerfall des targeting complex und der Übertragung des RNC auf das Translocon stattfindet. Weiter soll die Konformationsdynamik des SRP mit Hilfe von Einzelmolekül-FRET-Messungen untersucht werden. Schließlich sollen laufende Untersuchungen zur Struktur von SRP-Sribosomen- Komplexen mittels Cryo-Elektronenmikroskopie fortgesetzt werden.

• DFG Programme: Research Grants