In vitro und in vivo Analyse von DOMINO, einem ATP-verbrauchenden Histon-Austausch-Faktor aus der Familie der "split"-ATPasen

• Applicant: Privatdozent Dr. Anton Eberharter
• Subject Area: Biochemistry
• Term: from 2006 to 2010
• Project identifier: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 28075486

In Eukaryonten beeinflusst die nukleosomale Anordnung der DNA nahezu alle nuklearen Prozesse. ATP-verbrauchende Chromatin Remodelling Maschinen repräsentieren eine Gruppe von Enzymen, die Einfluss auf die nukleosomale DNA nehmen. Sie öffnen DNA Bereiche für Regulatoren oder ersetzen Histone durch bestimmte Histon-Varianten. Im Zuge dieses Projektes soll Drosophila DOMINO, ein Vertreter der bis dato noch wenig erforschten Familie der so genannten split -ATPase Remodeller , biochemisch und funktionell untersucht werden. Split - ATPasen weisen eine ungewöhnliche, zweigeteilte ATPase/Helikase Domäne auf. Wir wollen DOMINO Komplexe mittels konventioneller Reinigung, Affinitätsreinigung und Immun- Präzipitationen aus Drosophila Embryoextrakten und aus stabil exprimierenden DOMINO-Zelllinien isolieren. Parallel dazu werden wir auch Affinität-gereinigtes, rekombinantes DOMINO charakterisieren. Die molekulare Funktion von DOMINO sowie der DOMINO Komplexe wird in bestehenden Testsystemen untersucht und verglichen werden. DOMINO-assoziierte Untereinheiten sollen biochemisch charakterisiert und deren Assoziation durch Interaktionsstudien bestätigt werden. Die in vivo Relevanz von DOMINO wollen wir mittels transgenen Fliegen und in situ Lokalisationsstudien während der Embryogenese untersuchen.

• DFG Programme: Research Grants