Mikroscale-Thermophorese
Final Report Abstract
Das Gerät wurde umfangreich zur Untersuchung von Bindungskonstanten im Equilibrium sowie Stabilitäts/Affinitäts-Korrelationen eingesetzt. Insgesamt 59 unterschiedliche scFv/scFv-Fc Antikörper sowie 10 verschiedene IgG-Antikörper wurden bisher erfolgreich analysiert. Dabei wurde auch antragsgemäß erstmals eine Charakterisierung von scFv-Antikörperpräparationen im Hochdurchsatz demonstriert. Dabei konnte ebenfalls der bei Antragstellung erwartete Vorteil mit für unsere Arbeiten typischen Proben belegt werden, daß eine große Zahl von Antikörpern mit dem gleichen Batch eines Antigens ohne die Notwendigkeit von Chip-Regenrationen untersucht werden können. Die antragsgemäße Nutzung zur Untersuchung der Aggregationseigenschaft erfolgte ebenfalls. Eine eindeutige Korrelation mit der apparenten Thermostabilität wurde nicht beobachtet. Es erfolgte ein direkter Vergleich der für einen gut charakterisierten scFv-Antikörper gemessenen KD durch Microscale Thermophoresis (MST) mit den Ergebnissen Bio-Layer interferometry (BLI), Surface Acoustic Wave Technology (SAW) und Surface Plasmon Resonance (SPR). Die Ergebnisse belegen, daß die Messung im Equilibrium durchaus deutlich (bis zum Faktor 10) von den auf Oberflächen gemessenen Werten abweichen können.
