Functional analysis of point mutants of cardiac actin involved in dilative and hypertrophic cardiomyopathies

• Antragsteller: Professor Dr. Hans Georg Mannherz
• Fachliche Zuordnung: Nuklearmedizin, Strahlentherapie, Strahlenbiologie
• Förderung: Förderung von 2012 bis 2018
• Projektkennung: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Projektnummer 230430460

Es sollen die biochemischen Eigenschaften von Wildtyp (WT) und einer Reihe von Mutanten des Kardialen Aktins untersucht werden, die mit dilativer oder hypertropher Kardiomyopathie in Verbindung gebracht werden. WT und mutierte kardiale Aktine sollen mit Hilfe des Bacculovirus/Sf9 Insekten Zellsystems exprimiert werden. Nach Reinigung sollen ihr Polymerisationsverhalten und ihre Fähigkeit die kardiale ß-Myosin ATPase zu stimulieren bestimmt werden. Konstrukte sollen erzeugt werden, die ihre Expression in isolierten adulten (ARC) oder neonatalen (NRC) Kardiomyocyten der Ratte ermöglichen, um ihre Inkorporation in die dünnen Filamente der Sarkomere zu verfolgen. ARCs sollen nach ektopischer Expression von mutierten cardialen Aktinen auf mögliche Veränderungen ihrer mechanischen Eigenschaften untersucht werden. Eine mögliche Verbesserung der mechanischen Leistung von veränderten ARCs durch niedermolekulare Verbindungen soll geprüft werden. Zusätzlich soll der Effekt von Thymosin beta4 auf die Überlebensrate und die mechanische Leistung von Kontroll- und transfizierten ARCs analysiert werden. Mit Hilfe von Cryo-Elektronenmikroskopie sollen hoch aufgelöste Bilder von kardialem F-Aktin nach Dekoration mit Tropomyosin und kardialem Troponinkomplex in Ab- und Anwesenheit von Calciumionen und Myosin Motordomänen erzeugt und analysiert werden.

• DFG-Verfahren: Sachbeihilfen