Molybdenum transport and Mo-dependent gene regulation in bacteria
General Genetics and Functional Genome Biology
Final Report Abstract
Das photosynthetische Alphaproteobakterium Rhodobacter capsulatus fixiert molekularen Stickstoff mit Hilfe einer nifHDK-kodierten Molybdän-Nitrogenase und einer anfHDGK-kodierten Mofreien Eisen-Nitrogenase. Die Produktion dieser Nitrogenasen erfordert die Transkriptionsaktivatoren NifA beziehungsweise AnfA, welche den Sigma-Faktor RpoN zur Zielgenaktivierung benötigen. Neben der Mo-Nitrogenase kontrolliert NifA die Fe-Nitrogenase auf vier Ebenen. Zum ersten kontrolliert NifA die AnfA-Aktivität durch Kontrolle der RpoN-Produktion. Zum zweiten kontrolliert NifA die Produktion der Fe-Nitrogenase auf post-transkriptionaler Ebene. Zum dritten kontrolliert NifA die Biosynthese des Fe-Nitrogenase-Kofaktors FeFeco. Zum vierten kontrolliert NifA die Elektronenversorgung der Fe-Nitrogenase. Hiermit übereinstimmend wurde gezeigt, dass der anfH-Promoter der einzige strikt AnfA-abhängige Promoter ist, während alle anderen für die Fe-Nitrogenase relevanten Gene durch NifA aktiviert werden. Diese Beobachtungen legen nahe, dass die Fe-Nitrogenase weitgehend in das Mo-Nitrogenase-System integriert ist und nicht nur als alternatives System bei Mo-Mangel dient. Bei hinreichender Mo-Versorgung reprimieren R. capsulatus MopA und MopB unabhängig voneinander die Expression der mopA-modABC- und anfA-Operons. Hierdurch wird die Produktion des hochaffinen Molybdat-Transporters ModABC und der Fe-Nitrogenase auf Mo-Mangelbedingungen beschränkt. Diese Möglichkeit zur Mo-Kontrolle erklärt, warum R. capsulatus die Fe-Nitrogenase weiterhin über AnfA reguliert, während alle anderen für die Fe-Nitrogenase relevanten Gene unter Kontrolle von NifA stehen. Neben ModABC verfügt R. capsulatus über zwei weitere Molybdat-Transporter, die Permease PerO und den ModABC-ähnlichen Transporter MorABC. Unsere Studien zeigen, dass Molybdat, Wolframat und Sulfat typische Substrate von Permeasen der weitverbreiten aber weitgehend unerforschten PerO-Familie sind. Obwohl die morABC-Gene zum NifA-Regulon gehören, ist der MorABC- Tranporter entbehrlich für die Biosynthese des Mo-Nitrogenase-Kofaktors FeMoco. Da die hochabundante Mo-Nitrogenase als Mo-Sink wirkt, spielt MorABC möglicherweise eine wichtige Rolle bei der Biosynthese des Molybdopterin-Kofaktors, Moco, der für alle Molybdoenzyme mit Ausnahme der Mo-Nitrogenase essentiell ist. R. capsulatus MopA und MopB gehören zur Klasse der ModE-Einkomponenten-Regulatoren, welche direkt auf die zelluläre Molybdat-Menge reagieren. Bemerkenswerterweise synthetisieren viele Bakterien wie das Pflanzenpathogen Agrobacterium tumefaciens und der Pflanzensymbiont Sinorhizobium meliloti verkürzte ModES-Proteine, denen eine Molybdat-Bindedomäne fehlt. Wie die Volllängen-Regulatoren reprimieren auch die verkürzten ModES-Proteine die modABC-Expression bei hohen Mo-Konzentrationen. Im Gegensatz zu den Volllängen-Regulatoren reagieren ModES-Proteine jedoch nicht auf Molybdat sondern auf Moco-Verfügbarkeit.
Publications
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Demtröder, Pfänder & Masepohl