Durchflusszytometer

• Subject Area: Process Engineering, Technical Chemistry
• Term: Funded in 2011
• Project identifier: Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) - Project number 203734655

Wir sind eine Protein-Engineering Arbeitsgruppe, die für die Gelenkte Evolution Methoden entwickelt, um Eigenschaften von Proteinen zu verstehen. Jedes Gelenkte Evolutionsexperiment umfasst iterative Schritte von Vielfaltsgenerierung und Durchmusterung generierter Mutantenbibliotheken. Für die Vielfaltsgenerierung haben wir in den letzten 10 Jahren erfolgreich Methoden und Benchmarkingsysteme erforscht und kommerzialisiert (SeSaM-Technologie). Für die Hochdurchsatzdurchmusterung (HTS) haben wir basierend auf Arbeiten von Tawfik und Griffith, eine Emulsionstechnologie mit Durchflusszytometriedurchmusterung entwickelt, die für drei neue Enzymklassen eine Durchmusterung von >106 Varianten ermöglicht. Diese Ganzzelldurchmusterungssysteme sind in zwei Publikationen partiell publiziert. Aus technischen Gründen scheiterte die Entwicklung von in vitro Durchmusterungssystemen. Das beantragte Großgerät erlaubt uns die Entwicklung von in vitro Durchmusterungssystemen und ermöglicht damit erstmals rationale Modelle für die Evolvierbarkeit von Proteinfolds basierend auf experimentellen Daten zu entwickeln, neue Evolutionsstrategien mit hohen Mutageneseraten zu etablieren, Gelenkte Evolutionsexperimente signifikant zu beschleunigen (1xGelenkte Evolutionsrunde pro Tag) und Metagenombiblitoheken nach Enzymen mit geringen Hitraten (z.B. Monooxygenasen ~1Hit/106 pro 1 Klonen) durchzumustern.

• DFG Programme: Major Research Instrumentation
• Instrumentation Group: 3500 Zellzähl- und Klassiergeräte (außer Blutanalyse), Koloniezähler
• Applicant Institution: Rheinisch-Westfälische Technische Hochschule Aachen
• Leader: Professor Ulrich Schwaneberg, Ph.D.