Hochauflösendes Tandem-Massenspektrometer (UHPLC-MS/MS)
Final Report Abstract
Evaluierung und Implementierung eines hochauflösenden UPLC-TOF-MS Assays zur Quantifizierung von Medikamenten und deren Metaboliten: Bisher ist die Quantifizierung von Medikamenten und anderen kleinen Molekülen eine Domäne der herkömmlichen Tandem MS/MS Geräte. Der Einsatz eines TOF-MS Gerätes wurde anhand der simultanen Quantifizierung der Immunsupressiva Cyclosporin A, Tacrolimus, Sirolimus und Everolimus aus Vollblut untersucht. Es wurde ein UPLC-TOF-MS-Verfahren entwickelt und gemäß den CLSI-Guidelines validiert. Der Assay zeigt eine exzellente Korrelation zum herkömmlichen Tandem MS/MS–Verfahren und äquivalente Performance in Bezug auf Richtigkeit, Präzision, Genauigkeit und Linearität. Da bei dem Verfahren im Gegensatz zu herkömmlichen Tandem MS/MS-Methoden full-scan Daten aufgenommen werden, ließen sich auch non-targeted-Analysen durchführen. So können mit einer Messung sowohl der Medikamentenspiegel der vier Immunsuppressiva ermittelt werden als auch Metabolite identifiziert und semiquantitativ erfasst werden. Entwicklung einer massenspektrometrischen Methode zur quantitativen Bestimmung des Phospholipids Bismonoacylglycerophosphate (BMP): Antiphospholipid-Antikörper (aPL), wie sie beim Antiphospholipidsyndrom auftreten, können im Endosom als Folge der spezifischen Bindung des aPL an BMP, welches eine großen Anteil der Phospholipide im Endosom ausmacht, akkumulieren. Als Werkzeug zur Untersuchungen zum Pathomechanismus des Antiphospholipidsyndrom mittels Modulation der BMP-Konzentration wurde eine massenspektrometrische Methode zur Konzentrationsbestimmung BMP in kultivierten Zellen etabliert, die es erlaubt, die Modulation der BMP-Konzentration durch verschiedene Methoden, z.B. siRNA, Hemmung der Cholesterinesterhydrolyse u.a., zu verifizieren. Entwicklung von massenspektrometrischen Methoden zur quantitativen Bestimmung von Oligosacchariden bei lysosomalen Speicherkrankheiten: Projekt 1: Bestimmung der 6-α-D-Glucopyranosyl-Maltotriose (Glc4) bei Morbus Pompe Patienten. Methode ist entwickelt und validiert. Projekt 2: Bestimmung von Keratansulfat bei Mucopolysaccharidose Typ IV (Morbus Morquio). Ziel ist es zu klären, ob diese Markermoleküle zur Diagnostik und Kontrolle der Enzymsubstitutionstherapie geeignet sind. Methode ist entwickelt und validiert.
Publications
- Quantitative determination of four immunosuppressants by high resolution mass spectrometry (HRMS). Clin Chem Lab Med (CCLM), Band 54, Heft 7, S. 1193–1200
Bruns K, Mönnikes R, Lackner KJ
(See online at https://doi.org/10.1515/cclm-2015-0863)
